以下是365上市公司官网ELISA实验的技能要点与常见问题解析,结合实验操作规范及关键注意事项:
一、ELISA实验核心技能要点
试剂准备与平衡
试剂盒需室温平衡20-30分钟,避免温度差异影响反应稳定性。
标准品需涡旋溶解,静置至溶解,避免反复冻融。
加样规范
垂直悬空加样,避免贴壁或产生气泡,每孔加样量需一致(如50μL标准品或样本)。
设置复孔(至少2孔/样本)以提高数据可靠性。
孵育与洗涤
孵育温度严格控制在37℃,封板膜密封防止蒸发。
手工洗板需注满洗涤液(350μL/孔),静置1分钟后拍干,重复5次;机器洗板需检查冲洗头是否堵塞。
显色与检测
TMB底物避光反应15分钟,终止液加入后5分钟内测定OD值(450nm)。
二、常见问题及解决方案
问题 可能原因 解决方案
空白孔OD值过高 洗涤不净或试剂污染 更换新鲜洗涤液,重复洗板
平行孔CV值>10% 加样误差或孵育温度波动 校准移液器,使用恒温箱
显色不均匀 底物混合不充分 显色前充分摇匀试剂
三、关键注意事项
样本处理
血清/血浆需离心(2000×g,15分钟)去除颗粒物,避免溶血或脂血干扰。
组织匀浆需加PBS离心取上清,冻存样本需避免反复冻融。
数据验证
标准曲线R²需≥0.99,样本稀释线性应在80-120%范围内。
四、视频学习资源
如需更直观的操作演示,可参考以下视频:
以上内容综合了ELISA实验的操作要点与问题解决方案,实际应用中需结合试剂盒说明书调整细节。
注:以上资料仅供参考,具体其他信息请咨询技术老师或品牌供应商。
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