elisa预实验中常用的预处理方法有哪些

　　elisa预实验中常用的预处理方法有哪些

　　ELISA预实验的预处理分为‌样本预处理‌和‌微孔板预处理‌两类，不同类型样本的处理方法存在差异，具体如下，可参考：

　　一、样本预处理

　　1. 血清样本

　　采集后室温放置2小时(或4℃过夜)自然凝固，随后在2-8℃条件下以‌1000×g离心20分钟‌分离血清;立即检测则收集上清直接使用，若需保存需分装后冻存于-20℃或-80℃，避免反复冻融。

　　重点注意：严格避免溶血，溶血会释放过氧化物酶活性物质引发非特异性显色，影响结果准确性。

　　2. 血浆样本

　　采用含抗凝剂的采血管采集血液，采集后30分钟内，在2-8℃条件下以‌1000×g离心15分钟‌，收集上清后即可使用;不立即检测则分装冻存，同样避免反复冻融。

　　重点注意：不同试剂盒对抗凝剂有特殊要求，处理前需仔细阅读试剂盒说明书。

　　3. 细胞相关样本

　　细胞培养上清：‌1500 rpm离心10分钟(4℃)‌去除细胞碎片，收集上清后即可检测，冻存保存需分装避免反复冻融。

　　细胞裂解液：用预冷PBS洗涤细胞3次，重悬后反复冻融裂解细胞，再在2-8℃条件下以‌1500×g离心10分钟‌，收集上清即可。

　　4. 组织匀浆样本

　　用预冷PBS冲洗去除表面残留血液，称重后剪碎组织，按‌1:9的重量体积比‌(1g组织对应9mL预冷PBS)加入液体，冰浴下充分匀浆;可进一步超声破碎或反复冻融裂解细胞，随后在2-8℃条件下以‌5000×g离心5分钟‌，收集上清备用，全程冰上操作减少蛋白降解。

　　5. 其他常见样本

　　尿液/脑脊液：无菌容器收集后，‌1000×g离心15分钟(2-8℃)‌去除杂质，取上清即可检测。

　　粪便：用PBS重悬后冰上振荡15分钟，‌5000×g离心5分钟‌取上清即可。

　　6. 高浓度样本特殊预处理

　　若预估样本浓度较高，预实验需做梯度稀释处理：

　　稀释原则：将浓度降至试剂盒线性检测范围，推荐用含1% BSA的PBS缓冲液作为稀释液减少基质干扰。

　　梯度设计：低浓度样本做1:2、1:5、1:10梯度;高浓度样本做1:10、1:50、1:200大跨度梯度，确定OD值落在标准曲线线性区的最佳稀释倍数。

　　二、预实验微孔板预处理

　　目前ELISA试剂盒多已预先包被抗体，若自行包被(预实验摸包被条件)，常规处理流程为：

　　将包被抗体用包被缓冲液稀释至工作浓度，每孔加入200μL，37℃孵育4小时;

　　用洗涤缓冲液洗板4次，拍干后即可进行后续加样步骤，该流程适用于大多数TAS-ELISA、DAS-ELISA预实验体系。

　　注：以上科研产品资料供参考，具体可咨询技术老师!

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